广元市朝天区动物疫病免疫抗体监测技术规范（试行）

一、目的意义

   （一）准确把握免疫时期，避免免疫的盲目性。通过对畜禽体内抗体水平的检测，实际掌握动物机体的免疫状态，并指导按时免疫，做到有的放矢，避免免疫的盲目性，减少不必要的应激，增强免疫的针对性。

   （二）及时考核免疫效果，有利于提高免疫密度和质量。集中防疫后，对畜禽抗体水平进行抽样检测，可以增进对疫苗及免疫方法、免疫质量更深入的了解和掌握，促进免疫密度和质量的提高。

   （三）有利于促进畜牧业的发展。应用抗体检测技术加强对畜禽疫病的预警能力，采取针对性措施加强免疫，减少畜禽的发病率，提高养殖场户的经济效益。

二、适用范围

本规范适用于广元市朝天区行政区域内动物疫病免疫抗体的监测活动。

三、监测病种

动物免疫抗体监测重点是重大动物疫病（口蹄疫、高致病性禽流感、高致病性猪蓝耳病、猪瘟、新城疫）。

四、血样采集

（一）采样所需器材：防护服、防护口罩、无粉乳胶手套、灭菌剪刀、注射器、针头、空白标签纸、抗凝剂、75%酒精、碘酒、无菌棉签、15mL的离心管、1.5mLEP管、冰袋、冷藏箱（包）、胶布、记号笔、签字笔、血清采样单和调查表等。

（二）采血时间：一般免疫注射后21天的动物方可采血，其中猪口蹄疫、高致病性蓝耳病免疫注射后采血时间为28天后。  

（三）采血方法

1、采血时注意事项：采血场所有充足光线；室温夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜；采血用具和采血部位必须消毒；采血用注射器和试管必须保持清洁干燥。

2、采血部位及消毒：对采血部位的皮肤先剃（拔）毛， 75%的酒精消毒或碘酊消毒，待干燥后采血。采血方法根据动物种类和采血量多少采用不同的静脉采血方法，生猪耳静脉或前腔静脉、牛羊站立式颈静脉或耳静脉、禽类翅静脉采血，犬只后肢外侧皮下小隐静脉，采血过程严格无菌操作。

（四）采血数量

单一病种抗体监测的每头（只）采集2～3mL全血，多病种抗体检测的每头（只）采集5～10mL全血。

（五）采样单填写：采血时应按《广元市朝天区动物免疫血清采样单》（见表1）的内容详细填写采样单，动物血清采样单一式三份，一份由被采样单位保存，一份由送检单位保存，一份由检测单位保存。所有表格填写之前须仔细阅读表格及下面的相关备注或填表说明。应完整、清楚、工整填写，不得使用省略或简易符号替代，不得随意对表格进行合并或删除。

（六）全血保存

采集好的全血转入盛血试管，同时做好编号标记，斜面存放（角度约40°～60°），室温凝固后直接放在盛有冰块的保温箱送实验室。从全血采出到血清分出的时间不超过10h。

（七）血清分离与保存

1、分离血清

凝固全血在室温2～4h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入4℃冰箱4～8h后，待大量血清析出时，吸出血清。

必要时使用低速离心机制备血清：获得的血液不能抗凝，盛于离心管或可以离心的器皿中，静置或置37℃环境中促其凝固，待血液凝固后，将其平衡后离心（一般为3000rpm，离心 5～10min），得到的上清液即为血清，可小心将上清液吸出（注意切勿吸出细胞成分），分装备用。

每份血清量猪、牛、羊不少于1.0ml，禽不少于0.5 ml。

2、血清编号

血清编号、封装：同一种畜禽血清样品编通号，以“A01～A20、B01～B10、C01～C10、D01～D30、E01～E10、F01～F10”（字母与数字间不要加任何符号）模式编写。不同种类动物以不同英文字母标记（猪A，牛B，羊C，鸡D，犬E，鸭F）。用防水记号笔清晰标记于离心管，也可用标签贴上。编号时散养户编在前，规模场编在后。将编好号的各类动物血清用塑料自封袋分类封装。标签注明样品名称、样品数量、样品编号等

血清要求：无溶血、无腐败；血样不能混合，必须是一禽、一畜一个样。

3、血清保存及运送

样品正确的保存、运送是保证监测结果准确的重要条件。分离的血清样品，一般不加防腐剂。血清若能在1～2天内及时送检，可放在2～4℃的冰箱中短时间冷藏保存（切忌冷冻），若在1～2周内即可检验，可放在2～4℃冰箱内保存；如果保存时间较长，应放在-20℃以下冰箱内保存。冷冻的血清应避免反复冻融，影响监测结果。运送血清时可将血清放在盛有冰袋的保温箱中运送。送检时应提交《广元市朝天区动物免疫血清采样单》，检测完毕应取回样品留样记录表（见附表3）。

运送血清时应将血清放在盛有冰块的冷藏箱中运送，避免强烈震动。

五、抗体检测常用方法

高致病性禽流感：血凝抑制试验（HI）。

O型口蹄疫：正向间接血凝试验，液相阻断ELISA，使用合成肽疫苗免疫的，采用VP1结构蛋白ELISA进行检测。

亚洲Ⅰ型和A型口蹄疫：液相阻断ELISA。

猪瘟、高致病性猪蓝耳病：正向间接血凝试验或抗体阻断ELISA

新城疫：血凝抑制试验。

六、检测结果记录与汇总

每份血清检测完毕，做好记录（见附表2）。同时搞好抗体检测结果汇总。

七、血清留样

血清监测完以后，需要对血清进行编号留存，填写血清留样记录表（附表3）。

八、附表

1、广元市朝天区动物免疫血清采样单。

2、抗体检测结果记录表。

3、血清样品留样记录表。